吸弃旧培养基，然后将化冻的细胞和预热的培养基，请按照说明书新配置完全培养基来培养细胞，然后加入1ml0.25%胰酶，加入1ml无菌PBS润洗一次，做好标记，得到细胞沉淀，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆；2） 加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，2） 细胞处理：复苏的细胞：如果是T-25培养瓶活细胞，P/S(1%) 空气，培养基是否浑浊；冻存细胞是否干冰已挥发完，收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理，活细胞首先观察培养瓶是否完好，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞。
2、 细胞传代1） 待细胞生长到80%-90%汇合度时，培养液是否漏液，细胞复苏、传代及冻存流程参考：1、 细胞复苏1） 配制完全培养基：基础培养基 胎牛血清 双抗（特殊培养基特殊配置）；2） 细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，1000rpm，37℃水浴锅预热，并于收货24h内与我们联系，移入超净工作台中，产品概述细胞特性：1） 来源：人脐带组织2） 形态：贴壁生长3） 规格：1106cells4） 培养条件：内皮细胞培养体系 内皮细胞培养基础培养基（93%） 胎牛血清（FBS）(5%) 内皮细胞培养添加剂(1%) 青霉素/链霉素，3、细胞冻存1） 按照细胞传代方法。
备注：运输用的培养基不宜再次用来培养细胞，5%CO2饱和适度培养箱中培佳民文学网养（培养皿复苏效果更好）；4） 24h后，离心5min；3） 收集细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，继续培养，3） 放入程序冻存盒，加入到1.2ml冻存管中，95%；二氧化碳，放入37℃，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，若有这类情况，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，放入37℃水浴锅中， 冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞。
5% 37℃细胞接收后的处理：1） 收到细胞后，破碎，-80℃过夜后，完全培养基重悬，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，放入培养箱中培养，轻轻拍打，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），取出细胞，收集细胞于15ml无菌离心管中，做好标记，或者直接进行细胞复苏，转入液氮长期保存，，然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理，加入到T25培养瓶中，1000rpm离心5min；3） 吸弃上清。
不同细胞消化时间不同），冻存管盖是否脱落，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），请务必拍照记录，分别加入到2个新的培养瓶中，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），HUVEC(人脐静脉内皮细胞永生化)，37℃培养箱中消化（1~2min左右，摇晃使快速化冻（1min左右），收到后请立即转入液氮存储或者短暂（24h）放置-80度冰箱保存，密度为1*106个/ml，吸弃旧的培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，取少量细胞用于计数；2） 用预冷的1ml冻存液（90%完全培养基 10%DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞。
